核心提示：該研究在金魚中成功建立基于CRISPR/Cas12a系統(tǒng)的基因編輯系統(tǒng)，首次實現(xiàn)該系統(tǒng)在非模式魚類中基因組中的高效編輯，揭示了溫度可作為CRISPR/Cas12a編輯效率的開關，實現(xiàn)不同發(fā)育窗口的可控性條件基因敲除?！ㄊ澜缡称肪W(wǎng)-）

　　CRISPR/Cas技術自誕生以來，在農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥和食品安全等多個領域取得了革命性進展。作為一種源于細菌和古細菌的適應性免疫機制，CRISPR/Cas系統(tǒng)通過識別并切割外源DNA，從而防御病毒和質(zhì)粒的入侵。隨著該技術的不斷發(fā)展，CRISPR/Cas系統(tǒng)已經(jīng)被廣泛應用于基因編輯，并在不同物種中取得了顯著成果。特別是CRISPR/Cas12a（Cpf1）系統(tǒng)，其結(jié)構簡單、功能多樣，使其成為繼CRISPR/Cas9之后，基因編輯領域的另一重要工具。然而，CRISPR/Cas12a的應用僅僅限制于哺乳動物中或一些模式物種中，還未實現(xiàn)在非模式物種尤其是冷溫性動物中的應用。朱華研究員團隊系統(tǒng)性地評估了兩種CRISPR/Cas12a變體（LbCas12a和AsCas12a）在不同溫度和不同時間窗口下對酪氨酸酶（tyr）基因的編輯效果。研究結(jié)果表明Cas12a具有較強的溫度依賴性，尤其是AsCas12a在高溫條件下展現(xiàn)出明顯增強的編輯活性。僅通過一小時的短時高溫處理，便能實現(xiàn)有效的基因敲除，充分證明了CRISPR/Cas12a作為一種高效、快速的基因編輯工具的潛力。此外，溫度作為條件性觸發(fā)因子，能夠精確調(diào)控金魚胚胎發(fā)育過程中的基因敲除時機，為基因編輯的時空調(diào)控提供了新的策略。全基因組重測序結(jié)果進一步驗證了所獲得的突變體未出現(xiàn)脫靶效應，進一步確立了該技術的精準性和高效性。

　　本研究表明，CRISPR/Cas12a系統(tǒng)能夠作為CRISPR/Cas9系統(tǒng)的有效補充，尤其在溫度變化條件下具有更高的應用價值，極大擴展了基因編輯技術的應用范圍和潛力。此項技術不僅為金魚功能基因組學研究提供了高效的工具，也為水產(chǎn)養(yǎng)殖領域的基因編輯提供了新的技術支撐，并為低溫環(huán)境下的基因編輯提供了可行的解決方案。金魚CRISPR/Cas12a編輯技術的建立推動了水產(chǎn)養(yǎng)殖物種遺傳改良的技術革新，彰顯了基因編輯技術在水產(chǎn)動物育種中的廣泛應用前景。

　　水產(chǎn)所為論文第一完成單位，觀賞魚研究室李繪娟博士為第一作者，朱華研究員為通訊作者。該研究得到了北京市鄉(xiāng)村振興農(nóng)業(yè)科技項目（NY2401170024）、北京市農(nóng)林科學院院青年科學基金（QNJJ202238）、北京市農(nóng)林科學院院科技創(chuàng)新能力建設專項（KJCX20230216）等項目支持。

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