只要出現(xiàn)一篇關(guān)于CRISPR-Cas9的報道，Addgene的員工就會立刻找到它。這家非營利公司是論文作者經(jīng)常儲存研究中使用的分子工具的地方，也是其他科學(xué)家立即獲取這些分子工具的地方，還是一些科學(xué)家可以即刻得到相關(guān)試劑的地方。“一篇熱門論文發(fā)表之后，我們幾分鐘后就會接到電話?！边@家美國馬薩諸塞州坎布里奇市的公司執(zhí)行主任Joanne Kamens說。

　　從2013年年初開始，Addgene公司接到的電話就不斷增多。當(dāng)時研究人員稱利用CRISPR-Cas9技術(shù)，對所選位點人體細(xì)胞內(nèi)的基因組進(jìn)行了切片?！罢悄菚r發(fā)出了召集令?！盞amens說。從那時起，分子生物學(xué)家蜂擁著利用這種技術(shù) 一項可史無前例、輕而易舉地用于改變幾乎所有器官基因組的技術(shù)。Addgene目前已經(jīng)向83個國家的研究人員發(fā)送了6萬個與CRISPR相關(guān)的分子工具（占其總產(chǎn)品量的17%），2015年，該公司與CRFISPR相關(guān)的網(wǎng)頁閱覽次數(shù)超過1萬次。

　　目前，絕大多數(shù)關(guān)于CRISPR-Cas9的對話都是圍繞其治療疾病或編輯人類胚胎的潛力，但研究人員表示，真正的改革現(xiàn)在正在實驗室進(jìn)行。CRISPR可以提供的以及生物學(xué)家所希望的都是“專一性”：在一個基因組的巨大范圍內(nèi)靶向以及研究特定DNA序列的能力。編輯DNA只是該技術(shù)的一個可用方面?？茖W(xué)家正在利用這些工具將蛋白精確地傳遞到DNA目標(biāo)，以打開或關(guān)閉基因，甚至是對整個生物回路進(jìn)行基因編輯，其長遠(yuǎn)目標(biāo)是了解細(xì)胞系統(tǒng)和疾病。

　　“對于分子生物學(xué)家來說，這的確是非常強(qiáng)有力地了解基因組如何工作的方法?！瘪R薩諸塞州波士頓兒童醫(yī)學(xué)血液專家Daniel Bauer說?！八拇_提升了人們可解決問題的數(shù)量?！蹦霞又荽髮W(xué)分子生物學(xué)家Peggy Farnham補(bǔ)充說，“它蘊(yùn)涵著無窮的樂趣。”

　　近日，《自然》撰文介紹了5種CRISPR-Cas9正在改變的生物學(xué)家編輯細(xì)胞的方法。

　　CRISPR-Cas9技術(shù)有兩個主要成分：一個是Cas9酶，可以像一把分子剪刀一樣剪切DNA；另一個是小RNA分子，將“剪刀”引向具體的DNA序列并進(jìn)行剪切。細(xì)胞的固有DNA修復(fù)機(jī)器通常會修復(fù)剪切，但是經(jīng)常會發(fā)生錯誤。

　　盡管如此，這已經(jīng)給希望擾亂基因以了解其工作內(nèi)容的科學(xué)家?guī)砹烁＠；蚓幋a是無情的：修復(fù)中間發(fā)生的一個小小錯誤都會完全改變其編碼的蛋白序列，或是完全停止蛋白生產(chǎn)。因此，Kaiyun官網(wǎng)登錄入口 開云網(wǎng)站科學(xué)家可以在蛋白或基因擾亂時，研究細(xì)胞或有機(jī)體發(fā)生了什么。

　　但是還有一種不同的修復(fù)通道，有時也會根據(jù)DNA模板修復(fù)剪切。如果研究人員有了模板，那么他們就能夠在選擇的幾乎任何位點編輯幾乎任何想要的基因序列。

　　加州大學(xué)舊金山分校系統(tǒng)生物學(xué)家Jonathan Weissman團(tuán)隊希望了解這種基因編輯工具在剪切人類DNA方面究竟表現(xiàn)如何，但他們打算采用一種不同的方法?！拔覀冏龅牡谝患率牵捍蚱萍羟小！盬eissman說。該團(tuán)隊用“死”Cas9嘗試了一些新方法。研究人員將其系在另一個蛋白的一部分上，該蛋白能夠激活基因表達(dá)。加了幾個其他扭曲，他們最終讓基因可以根據(jù)意愿打開及關(guān)閉。

　　此后，若干實驗室基于該方法發(fā)表了不同的研究成果。該方法也吸引了麻省理工學(xué)院合成生物學(xué)家Ron Weiss加入CRISPR的研究熱潮。該團(tuán)隊在一次實驗中建立了多個基因扭曲，使其可以更快、更簡便地構(gòu)建復(fù)雜的生物學(xué)回路?！昂铣缮飳W(xué)最重要的目標(biāo)是能夠通過這些精確的回路構(gòu)建復(fù)雜的行為?！盬eiss說。

　　當(dāng)遺傳學(xué)家Marianne Rots開始其職業(yè)生涯時，她希望發(fā)現(xiàn)新的醫(yī)療方法，通過基因療法靶向那些疾病變異基因。幾年后，在荷蘭格羅寧根大學(xué)醫(yī)學(xué)中心工作的她決定改變行動方向。她認(rèn)為，控制基因活動的最佳方法是調(diào)整表觀基因組，而不是基因組本身。

　　表觀基因組是附加在DNA及DNA包裹蛋白化合物（即組蛋白）上的集合體。它們能夠控制DNA通路，打開或是關(guān)閉通向基因表達(dá)的蛋白。而這些標(biāo)記會隨時間改變：隨著有機(jī)體發(fā)育及環(huán)境變化，它們會被添加或去除。

　　過去幾年，數(shù)百萬美元已被投入到這一領(lǐng)域，如計算不同人體細(xì)胞中的表觀遺傳標(biāo)記以及與大腦活動和腫瘤生長相關(guān)聯(lián)的遺傳模式。但是由于沒有能力改變具點的標(biāo)記，研究人員就不能決定它們是否會導(dǎo)致生物學(xué)變化。

　　CRISPR-Cas9將會扭轉(zhuǎn)局勢。2015年4月，北卡羅萊納州生物工程師Charles Gersbach和同事發(fā)表了一項技術(shù)，利用剪切將乙?；ㄒ环N表觀遺傳標(biāo)記）添加到組蛋白上。

　　Rots曾利用相對較老的基因編輯工具鋅指酶蛋白探索表觀遺傳標(biāo)記的功能，現(xiàn)在她在利用CRISPR-Cas9。“新工具讓這一領(lǐng)域變得民主化，而且已經(jīng)產(chǎn)生了廣泛影響?！彼f。Rots表示，人們以前經(jīng)常說，如果重新編寫表觀遺傳基因，并不會對基因表達(dá)造成影響，或者兩者之間的關(guān)系是巧合?！暗乾F(xiàn)在測試起來非常簡單，很多人都在加入這一領(lǐng)域?！彼f。

　　DNA表觀遺傳標(biāo)記并非唯一等待解開的基因代碼。超過98%的人類基因組均未指明蛋白質(zhì)遺傳密碼。研究人員認(rèn)為，大量的DNA發(fā)揮著重要作用，所以他們正在利用CRISPR-Cas9了解代碼是什么。

　　RNA分子的一些編碼，如小分子RNA和小分子核糖核酸和長非編碼RNA，被認(rèn)為與生產(chǎn)蛋白沒有關(guān)系，其他序列是在其指令下擴(kuò)大基因表達(dá)的“增強(qiáng)子”。大多數(shù)與常見疾病風(fēng)險相關(guān)的DNA序列位于包含非編碼RNA及增強(qiáng)子的基因組區(qū)域。但是在CRISPR技術(shù)之前，研究人員很難了解那些序列在做什么?！拔覀儧]有好方法在功能上解釋非編碼基因組?！盉auer說，“現(xiàn)在，我們的實驗精巧多了。”

　　隨著研究人員利用CRISPR-Cas9技術(shù)探索越來越多的常規(guī)DNA，可能還會出現(xiàn)更多驚喜。然而，即便是利用CRISPR-Cas9，探索這一未知領(lǐng)域也存在挑戰(zhàn)。Cas9酶能在RNA向?qū)У闹敢录羟行枰庉嫷牡胤剑@只能是當(dāng)一種具體、常見的DNA序列位于剪切點附近時。這會給那些希望讓某個基因沉默的科學(xué)家?guī)硪稽c難題，因為關(guān)鍵的序列幾乎永遠(yuǎn)存在于該基因內(nèi)部。研究人員正在探索細(xì)菌王國，尋找能夠識別不同序列的Cas9酶的“親族”。

　　去年，麻省理工學(xué)院和哈佛大學(xué)下屬博德研究院Feng Zhang實驗室發(fā)現(xiàn)，一個叫作Cpf1的酶的家族能夠擴(kuò)展序列選擇。但是Agami強(qiáng)調(diào)，到目前為止所發(fā)現(xiàn)的像Cas9一樣用途廣泛的酶仍然非常少。未來，他希望能夠擁有整個系列的、可用于靶向基因組中任何位點的酶?！拔覀儸F(xiàn)在還沒有到達(dá)那里?！彼f。

　　Gersbach實驗室正在利用基因編輯技術(shù)作為理解細(xì)胞命運以及如何操縱細(xì)胞的部分工具：該團(tuán)隊希望未來有一天能夠在培養(yǎng)皿中培育出組織，用于藥物檢測和細(xì)胞療法。但是CRISPR-Cas9的作用是永久的，Gersbach團(tuán)隊需要不時地打開或關(guān)閉基因，并且要在組織中非常具體的位點進(jìn)行。“模擬血管需要高度的控制力?！彼f。

　　Gersbach和同事選擇了不規(guī)則的編輯“剪刀”現(xiàn)在能夠激活基因的Cas9，并加入了通過藍(lán)光激活的蛋白。當(dāng)細(xì)胞接觸光線后，該系統(tǒng)能夠激發(fā)基因表達(dá)；但沒有光后，系統(tǒng)會停止基因表達(dá)。由日本東京大學(xué)生化學(xué)家Moritoshi Sato帶領(lǐng)的團(tuán)隊研發(fā)了類似的系統(tǒng)，并且也可以在接觸到藍(lán)光后激活Cas9，實現(xiàn)基因編輯。

　　通過將CRISPR技術(shù)與化學(xué)“開關(guān)”相結(jié)合，其他人也得到了類似的結(jié)果。紐約威爾康乃爾醫(yī)學(xué)院癌癥遺傳學(xué)家Lukas Dow希望在成年大鼠體內(nèi)產(chǎn)生與癌癥變異相關(guān)的基因，從而復(fù)制出在人類結(jié)腸直腸癌患者中發(fā)現(xiàn)的基因突變。該團(tuán)隊利用CRISPR-Cas9技術(shù)，通過一個劑量的脫氧土霉素激活Cas9，從而使其切斷靶向目標(biāo)。

　　從癌癥到神經(jīng)退行性疾病等領(lǐng)域的研究人員正在通過CRISPR-Cas9技術(shù)創(chuàng)建疾病動物模型。這讓研究人員對更多動物、以更復(fù)雜的方式、在更大的范圍內(nèi)進(jìn)行基因編輯。馬薩諸塞大學(xué)醫(yī)學(xué)院癌癥研究專家Wen Xue正在系統(tǒng)地選擇腫瘤基因數(shù)據(jù)，利用CRISPR-Cas9模擬培養(yǎng)皿以及動物體內(nèi)細(xì)胞生長過程中的突變。

　　研究人員希望通過混合匹配新的CRISPR-Cas9工具，精確操縱動物模型的基因組和表觀基因組。“真正的力量是整合那些系統(tǒng)。”Dow說。這可能會讓科學(xué)家獲悉及理解常見疾病的復(fù)雜特征。

　　生物工程師Patrick Hsu在2015年建立其位于加州薩克生物研究所的實驗室，旨在利用基因編輯技術(shù)在培養(yǎng)皿以及絨猴身上模擬神經(jīng)退行性疾病，如阿爾茨海默氏癥和帕金森氏癥。那樣將能夠比大鼠模型更有效地重現(xiàn)人體疾病，但是在沒有CRISPR-Cas9之前，實現(xiàn)這一切成本極其高昂，且過程極為緩慢。

　　即便在他設(shè)計的實驗進(jìn)行首個CRISPR-Cas9狨猴基因編輯時，Hsu也很清楚，這種方法只是下一種技術(shù)的“踏腳石”?！翱茖W(xué)技術(shù)舊的去了，新的又來了。你不能永遠(yuǎn)和一種技術(shù)談戀愛?！彼f，“你應(yīng)該永遠(yuǎn)在思考，什么樣的生物學(xué)問題尚待解決?！保t楓）