美國(guó)普林斯頓大學(xué)Britt Adamson、加州大學(xué)舊金山分校Jonathan S. Weissman等研究人員合作取得一項(xiàng)新成果。他們開(kāi)發(fā)出直接向?qū)NA（sgRNA）捕獲和靶向測(cè)序的組合式單細(xì)胞CRISPR篩選技術(shù)。2020年3月30日，《自然生物技術(shù)》在線(xiàn)發(fā)表了這一成果。

　　研究人員報(bào)道了直接捕獲Perturb-seq，這是一種通用的篩選方法，其中表達(dá)的sgRNA與單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組一起測(cè)序。直接捕獲Perturb-seq可檢測(cè)單個(gè)細(xì)胞中多個(gè)不同的sgRNA序列，因此可將合并的單細(xì)胞CRISPR篩選輕松與包含雙向?qū)П磉_(dá)載體的組合擾動(dòng)文庫(kù)配對(duì)。

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　　研究人員證明了這種方法對(duì)遺傳相互作用高通量研究的實(shí)用性，并利用這種能力，剖析了膽固醇生物發(fā)生與DNA修復(fù)之間的上位相互作用。使用直接捕獲Perturb-seq，研究人員還發(fā)現(xiàn)，針對(duì)每個(gè)細(xì)胞具有多個(gè)sgRNA的單個(gè)基因，這一技術(shù)可以提高CRISPR干擾和激活的效率，從而有助于將緊湊、高效的CRISPR庫(kù)用于單細(xì)胞篩選。

　　最后，研究人員證明了基于雜交的靶標(biāo)富集能夠?qū)?lái)自單細(xì)胞RNA-seq實(shí)驗(yàn)的有用轉(zhuǎn)錄本進(jìn)行靈敏、特異的測(cè)序。

　　據(jù)了解，單細(xì)胞CRISPR篩選可以探索哺乳動(dòng)物的基因功能和遺傳調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。但是，由于依賴(lài)于單個(gè)sgRNA的間接索引，該技術(shù)的使用受到了限制。

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